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2021-08-11

細胞周期(cellcycle)是指細胞從一次分裂完成開始到下一次分裂結(jié)束所經(jīng)歷的全過程,分為間期與分裂期兩個階段。間期又分為三期、即DNA合成前期(G1期)、DNA合成期(S期)與DNA合成后期(G2期)。細胞分裂期又稱M期。細胞通過M期一分為二,有的可繼續(xù)分裂進行周期循環(huán),有的轉(zhuǎn)入G0期。G0期是脫離細胞周期暫時停止分裂的一個階段。但在一定適宜刺激下,又可進入周期(圖1),合成DNA與分裂。G0期的特點為:在未受刺激的G0細胞,DNA合成與細胞分裂的潛力仍然存在;當(dāng)G0細胞...

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2021-08-02

1、樣本準備過程中防止蛋白質(zhì)降解和保留翻譯后修飾樣本準備過程中,細胞會釋放蛋白酶和/或去磷酸化酶,為了減少這些酶的活性,處理樣本的過程應(yīng)在冰上進行,并預(yù)先冷卻所有緩沖液,并且建議用含蛋白酶和磷酸酶抑制劑的裂解緩沖液。2、磷酸化特異性抗體的選擇選擇磷酸化特異性抗體時,選擇所要檢測位點的磷酸化抗體至關(guān)重要。磷酸化都會使蛋白質(zhì)的分子量增加80Da,檢查抗體是否檢測到磷酸化靶蛋白的分子量正確的條帶也很重要。3、誘導(dǎo)磷酸化課題設(shè)計可能需要在收獲前刺激細胞,以確保蛋白質(zhì)被磷酸化。例如,在...

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2021-08-02

蛋白轉(zhuǎn)印的方法蛋白轉(zhuǎn)印可選擇傳統(tǒng)濕轉(zhuǎn)、半干轉(zhuǎn)或快速半干轉(zhuǎn)方法。濕轉(zhuǎn)系統(tǒng):適用于大多數(shù)各種分子量的常規(guī)蛋白轉(zhuǎn)印。轉(zhuǎn)印過程中凝膠和膜被浸入充滿轉(zhuǎn)印緩沖液的槽中。半干轉(zhuǎn)系統(tǒng):凝膠和膜被夾在預(yù)先潤濕緩沖液的濾紙之間,濾紙與平板電極直接接觸。半干轉(zhuǎn)系統(tǒng)的安裝使用比濕轉(zhuǎn)簡單??焖俎D(zhuǎn)印系統(tǒng):快速轉(zhuǎn)印系統(tǒng)是最近發(fā)展出來的技術(shù),使用專用設(shè)備、專用濾紙及專用緩沖液來快速有效地轉(zhuǎn)印蛋白。通常濾紙和濕潤的膜預(yù)先放在一次性包裝中,簡化了轉(zhuǎn)印“三明治”的組裝。轉(zhuǎn)印緩沖液轉(zhuǎn)印緩沖液包含強導(dǎo)電性化學(xué)緩沖試劑...

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2021-07-30

中山大學(xué)藥學(xué)院于7月27日發(fā)布通報,該院2021年7月27日發(fā)生一起實驗安全事故,實驗=室在清理通風(fēng)柜時發(fā)現(xiàn)之前畢業(yè)生遺留在燒瓶內(nèi)的未知白色固體,一博士研究生用水沖洗時發(fā)生炸裂,炸裂產(chǎn)生的玻璃碎片刺破該生手臂動脈血管,送醫(yī)救治傷情得到控制,無生命危險。與實驗室負責(zé)老師溝通分析,導(dǎo)致炸裂的未知白色固體中可能含有氫化鈉或氫化鈣,遇水發(fā)生劇烈反應(yīng)而炸裂。實驗室的瓶瓶罐罐清洗是科研工作者最日常的工作,但是,如果你并不確定瓶內(nèi)裝的是什么東西,千萬不要隨意就拿去清洗!有些化學(xué)品遇水會發(fā)生...

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2021-07-29

研究人員發(fā)現(xiàn),盡管大腦通過中腦產(chǎn)生5-羥色胺的神經(jīng)元來調(diào)節(jié)快感和饑餓感的進食,但每種進食方式都是由自己獨立的電路連接的,不影響其他類型的進食方式。美國疾病控制與預(yù)防中心(CentersforDiseaseControlandPrevention)的數(shù)據(jù)顯示,無論是由饑餓還是愉悅引起的暴飲暴食,通常都會導(dǎo)致肥胖。美國約42%的成年人都患有肥胖癥。一個由貝勒醫(yī)學(xué)院(BaylorCollegeofMedicine)的研究人員領(lǐng)導(dǎo)的國際研究小組在動物模型上研究了大腦是如何調(diào)節(jié)饑餓或其...

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2021-07-29

基本原理:外源目的DNA與載體分子的連接稱為DNA重組,重組的DNA稱為重組體或重組子。研究中需要克隆或表達的基因為外源DNA,載體是指能夠攜帶外源基因進入受體細胞,并在其中進行擴增或誘導(dǎo)外源基因表達的工具,其中質(zhì)粒載體最為常用。質(zhì)粒是獨立于細菌染色體外具有自我復(fù)制的DNA分子。所有的質(zhì)粒都有復(fù)制子、選擇性標志和多克隆位點3個共同的特性。質(zhì)粒載體的選擇包括載體的大小、載體拷貝數(shù)、多接頭以及篩選插入片段的能力,pcDNA3.1(+/-)是比較常用的真核表達載體?;静襟E:1、目...

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2021-07-29

CCK8全稱CellCountingKit-8,是一種基于WST-8(化學(xué)名為2-(2-甲氧基-4-硝基苯)-3-(4-硝基苯)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)的應(yīng)用于細胞增殖和細胞毒性的快速、高靈敏度檢測試劑盒。其工作原理類似于MTT,在電子耦合試劑存在的情況下,WST-8可以被線粒體內(nèi)的脫氧酶還原生成高度水溶性的橙黃色的甲臜產(chǎn)物(formazan)。顏色的深淺與細胞的數(shù)量有關(guān)。CCK8法在藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性實驗、腫瘤藥敏試驗以及生物因子的活性檢...

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